Plasmide CRISPR d'Activation (m) 6CKine: sc-437226-ACT

Le gène murin **Ccl21b** code la chimiokine **6CKine (CCL21)**, un ligand de **CCR7** qui dirige la chimiotaxie des lymphocytes T naïfs, des lymphocytes T mémoire centraux et des cellules dendritiques matures vers l’endothélium lymphatique et vers les zones T des organes lymphoïdes secondaires. En établissant des gradients le long des vaisseaux lymphatiques et au sein des ganglions lymphatiques, 6CKine soutient le trafic des cellules immunitaires, la surveillance antigénique et l’organisation des microenvironnements lymphoïdes. La signalisation **CCL21–CCR7** s’articule avec des voies médiées par des **RCPG (GPCR)** qui régulent le remodelage de l’actine, l’activation des intégrines et la migration directionnelle, influençant le positionnement des leucocytes et le dialogue stroma–immunité. Une activité dérégulée de l’axe **CCL21/CCR7** a été associée à une modification du recrutement des cellules inflammatoires, à un remodelage immunitaire lié à la lymphangiogenèse et à des changements du microenvironnement observés dans des contextes immuno-médiés et néoplasiques.

6CKine Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ccl21b sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

6CKine Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ccl21b dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ccl21b, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 6CKine. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ccl21b natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 6CKine au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 6CKine dans les cellules tumorales présentant une expression de Ccl21b silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.