Plasmide CRISPR d'Activation (h) 52 kDa Ro/SSA: sc-400885-ACT

TRIM21 code pour la protéine Ro/SSA de 52 kDa, une ligase E3 de l’ubiquitine qui agit comme un récepteur Fc cytosolique, couplant des cibles liées à des anticorps à une dégradation protéasomale dépendante de l’ubiquitine. Elle module la signalisation de l’immunité innée et les programmes géniques inflammatoires en régulant des intermédiaires clés de voies telles que l’interféron de type I et NF-κB, façonnant ainsi les réponses antivirales et au stress. TRIM21 participe également au contrôle qualité des protéines et au renouvellement des complexes de signalisation, reliant l’ubiquitination aux sorties transcriptionnelles. Une dérégulation de la reconnaissance immunitaire associée à Ro/SSA et de la signalisation contrôlée par TRIM21 a été impliquée dans des phénotypes auto-immuns associés aux auto-anticorps, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la tolérance immunitaire et l’inflammation.

52 kDa Ro/SSA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRIM21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

52 kDa Ro/SSA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRIM21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRIM21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 52 kDa Ro/SSA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRIM21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 52 kDa Ro/SSA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 52 kDa Ro/SSA dans les cellules tumorales présentant une expression de TRIM21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.