Plasmide CRISPR/Cas9 KO 4E-BP2 (m): sc-420150

Présentation

Eif4ebp2 code 4E-BP2, un répresseur de la traduction sensible à la phosphorylation qui se lie à eIF4E et module l’assemblage du complexe d’initiation de la traduction eIF4F dépendant de la coiffe. En tant qu’effecteur en aval de l’axe de signalisation PI3K–AKT–mTOR, 4E-BP2 intègre des signaux liés aux nutriments, aux facteurs de croissance et au stress afin d’ajuster la traduction globale ainsi que la traduction sélective de certains ARNm. Dans les tissus murins, 4E-BP2 contribue à la protéostasie et aux programmes de synthèse protéique dépendants de l’activité, reliant le contrôle translationnel à la croissance cellulaire, à l’adaptation métabolique et à la différenciation. Une signalisation mTOR–4E-BP dérégulée et une traduction aberrante dépendante de la coiffe sont fréquemment associées à des phénotypes prolifératifs et neurobiologiques, faisant d’Eif4ebp2 un point d’entrée utile pour des études mécanistiques du contrôle de la traduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO 4E-BP2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eif4ebp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eif4ebp2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eif4ebp2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine 4E-BP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eif4ebp2 pour l'étude de la signalisation de 4E-BP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Eif4ebp2 essentiels à la fonction de 4E-BP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eif4ebp2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le 4E-BP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le 4E-BP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eif4ebp2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le 4E-BP2 plasmide HDR (m) et le 4E-BP2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eif4ebp2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eif4ebp2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.