Particules Lentivirales d'Activation (m) 4E-BP1: sc-420149-LAC

Le gène murin **Eif4ebp1** code **4E‑BP1**, un répresseur de la traduction dépendante de la coiffe, sensible à la phosphorylation, qui se lie à eIF4E et limite l’assemblage du complexe d’initiation eIF4F. En tant qu’effecteur canonique en aval de la voie **PI3K–AKT–mTOR**, 4E‑BP1 intègre les signaux liés aux nutriments, aux facteurs de croissance et au stress afin d’ajuster la synthèse protéique, la croissance cellulaire et les programmes métaboliques. La phosphorylation médiée par **mTORC1** libère eIF4E et favorise la traduction d’ARNm impliqués dans la prolifération et la survie, reliant ainsi 4E‑BP1 à la régulation de la progression du cycle cellulaire et aux réponses adaptatives au stress. Une phosphorylation dérégulée de 4E‑BP1 et la disponibilité d’eIF4E sont largement utilisées comme biomarqueurs d’une altération de la signalisation mTOR dans des contextes tels que la transformation oncogénique, des défauts de signalisation de l’insuline et des états inflammatoires, ce qui étaye des études mécanistiques dans des modèles pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales 4E-BP1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Eif4ebp1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales 4E-BP1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Eif4ebp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de 4E-BP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Eif4ebp1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.