Plasmide Double Nickase (h) 4E-BP1: sc-400398-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 4E-BP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 4E-BP1 Double Nickase (h) et le plasmide 4E-BP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF4EBP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 4E-BP1 Antibody (P-1): sc-9977
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 4E-BP1 | sc-400398-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 4E-BP1 | sc-400398-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4EBP1 code la protéine 4E-BP1, un inhibiteur de la traduction dépendante de la coiffe, régulé par phosphorylation, qui se lie à EIF4E et limite l’assemblage du complexe d’initiation EIF4F. La phosphorylation de 4E-BP1 médiée par mTORC1 libère EIF4E et favorise la synthèse protéique, reliant la détection des nutriments et des facteurs de croissance au contrôle de la traduction, à la croissance cellulaire et à l’adaptation métabolique. Ce nœud intègre la signalisation PI3K–AKT–mTOR à des programmes sensibles au stress et influence l’expression d’ARNm oncogéniques et pro-survie. Des modifications de l’abondance de 4E-BP1 ou de son état de phosphorylation sont fréquemment associées à une prolifération et à un métabolisme dérégulés dans la biologie des cancers et d’autres troubles liés à la voie mTOR.
4E-BP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF4EBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF4EBP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF4EBP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF4EBP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.