Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
4E-BP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420149
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 4E-BP1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico 4E-BP1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: 4E-BP1 Antibody (P-1): sc-9977
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
4E-BP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420149 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino Eif4ebp1 codifica 4E-BP1, un repressore della traduzione cap-dipendente che si lega a EIF4E e limita l’assemblaggio del complesso eIF4F, modulando così l’inizio della traduzione degli mRNA in risposta a segnali nutritivi e a fattori di crescita. 4E-BP1 è un effettore chiave a valle dell’asse PI3K–AKT–mTORC1; la fosforilazione mediata da mTORC1 allevia il sequestro di EIF4E e promuove la traduzione selettiva di trascritti coinvolti nella crescita cellulare, nel metabolismo e nell’adattamento allo stress. Attraverso questo checkpoint traslazionale, Eif4ebp1 contribuisce alla regolazione dell’autofagia, della progressione del ciclo cellulare e dei programmi di proteostasi. La deregolazione della segnalazione di 4E-BP1 è ampiamente utilizzata come indicatore molecolare di un’attività anomala della via mTOR in modelli di biologia del cancro, disfunzione metabolica e processi neuroevolutivi e neurodegenerativi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO 4E-BP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eif4ebp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eif4ebp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eif4ebp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina 4E-BP1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eif4ebp1 per lo studio della segnalazione di 4E-BP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Eif4ebp1 critici per la funzione di 4E-BP1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eif4ebp1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal 4E-BP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal 4E-BP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eif4ebp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal 4E-BP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR 4E-BP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eif4ebp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eif4ebp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.