Plasmide CRISPR d'Activation (m) 4E-BP1: sc-420149-ACT

Le gène murin **Eif4ebp1** code **4E‑BP1**, un répresseur de la traduction sensible à la phosphorylation qui se lie à **eIF4E** afin de freiner la traduction dépendante de la coiffe et la synthèse protéique globale. En réponse aux facteurs de croissance et aux nutriments, la phosphorylation de 4E‑BP1 médiée par **mTORC1** libère eIF4E, favorisant l’assemblage du complexe **eIF4F** et des programmes de traduction sélectifs qui régulent la croissance cellulaire, le métabolisme, l’adaptation au stress et la prolifération. Ce nœud intègre la signalisation **PI3K–AKT–mTOR** à la biogenèse des ribosomes et à la protéostasie, faisant d’**Eif4ebp1** un déterminant clé du contrôle translationnel dans des contextes tels que la régulation métabolique et la signalisation oncogénique. L’état de phosphorylation de 4E‑BP1 et la disponibilité d’eIF4E sont largement utilisés comme indicateurs d’activation de la voie et ont été associés à des phénotypes de croissance et de survie dérégulés dans des modèles pertinents pour les maladies.

4E-BP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Eif4ebp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

4E-BP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Eif4ebp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Eif4ebp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 4E-BP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Eif4ebp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 4E-BP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 4E-BP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Eif4ebp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.