Plasmide Double Nickase (h) 4.1N: sc-404584-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 4.1N correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 4.1N Double Nickase (h) et le plasmide 4.1N Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EPB41L1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 4.1N Antibody (B-2): sc-374367
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 4.1N | sc-404584-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 4.1N | sc-404584-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPB41L1 code la protéine 4.1N, un adaptateur cytosquelettique à domaine FERM qui relie des protéines membranaires au réseau cortical d’actine et contribue à organiser des domaines membranaires spécialisés dans les cellules humaines. 4.1N participe à la forme cellulaire, à l’adhérence et à la stabilité de la membrane en régulant des complexes protéiques à la membrane plasmique et en influençant le remodelage de l’actine ainsi que le trafic intracellulaire. Par ces fonctions, EPB41L1 est impliqué dans des processus tels que l’extension des neurites et l’organisation synaptique, et sa dérégulation a été étudiée dans des contextes incluant des modifications de la migration cellulaire et la progression oncogénique. L’étude d’EPB41L1 permet d’analyser les mécanismes de couplage membrane–cytosquelette et les événements de signalisation qui dépendent d’un contrôle spatial des assemblages de récepteurs et de protéines d’échafaudage.
4.1N Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPB41L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPB41L1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPB41L1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPB41L1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.