Plasmide CRISPR/Cas9 KO 3β-HSD6 (m): sc-420970

Présentation

La protéine 3β-HSD6 est codée chez la souris par le gène **Hsd3b6**. Il s’agit d’une hydroxystéroïde déshydrogénase qui catalyse des étapes clés d’oxydoréduction dans la biosynthèse des hormones stéroïdiennes, en interconvertissant les 3β-hydroxystéroïdes et les 3-cétostéroïdes. Cette activité soutient le flux stéroïdogène et contribue au maintien de l’homéostasie stéroïdienne cellulaire, influençant en aval la signalisation des récepteurs nucléaires ainsi que des programmes transcriptionnels plus larges régulés par le système endocrinien. Une altération de la fonction de la famille des 3β-HSD peut modifier les réservoirs de précurseurs des androgènes, des œstrogènes et des corticostéroïdes, reliant ce nœud enzymatique aux recherches en biologie de la reproduction, en physiologie surrénalienne/gonadique et en régulation métabolique. **Hsd3b6** est donc pertinent pour analyser comment les enzymes stéroïdogènes façonnent des réseaux de signalisation et des phénotypes spécifiques des tissus dans des systèmes modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO 3β-HSD6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hsd3b6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hsd3b6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hsd3b6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine 3β-HSD6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hsd3b6 pour l'étude de la signalisation de 3β-HSD6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hsd3b6 essentiels à la fonction de 3β-HSD6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hsd3b6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le 3β-HSD6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le 3β-HSD6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hsd3b6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le 3β-HSD6 plasmide HDR (m) et le 3β-HSD6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hsd3b6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hsd3b6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.