20S Proteasome β2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403536

Visão geral

PSMB2 codifica a subunidade catalítica β2 do núcleo do proteassoma 20S humano, um componente central do sistema ubiquitina–proteassoma que regula a renovação proteica dependente de ATP e o processamento de antígenos. Como parte do proteassoma 26S, a β2 do 20S contribui para a clivagem proteolítica de substratos poliubiquitinados, moldando a proteostase, a progressão do ciclo celular, as respostas ao estresse e vias de sinalização como a NF-κB por meio da degradação regulada de reguladores-chave. A atividade do proteassoma influencia a vigilância imune ao gerar peptídeos para apresentação por MHC de classe I e afeta a estabilidade de proteínas envolvidas em vias de dano ao DNA e de apoptose. A disfunção do proteassoma e alterações na expressão de suas subunidades têm sido implicadas na biologia do câncer, na sinalização inflamatória e em fenótipos neurodegenerativos de agregação proteica, tornando o PSMB2 um alvo útil para estudos mecanísticos de proteostase e adaptação celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO 20S Proteasome β2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PSMB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PSMB2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PSMB2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína 20S Proteasome β2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PSMB2 para a investigação da sinalização de 20S Proteasome β2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PSMB2 críticos para a função 20S Proteasome β2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PSMB2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo 20S Proteasome β2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo 20S Proteasome β2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PSMB2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo 20S Proteasome β2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR 20S Proteasome β2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PSMB2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PSMB2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.