20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403536

Übersicht

PSMB2 kodiert die katalytische β2‑Untereinheit des menschlichen 20S‑Proteasom‑Kernpartikels, einer zentralen Komponente des Ubiquitin‑Proteasom‑Systems, das den ATP‑abhängigen Proteinumsatz und die Antigenprozessierung steuert. Als Teil des 26S‑Proteasoms trägt 20S β2 zur proteolytischen Spaltung polyubiquitinierter Substrate bei und prägt damit die Proteostase, die Zellzyklusprogression, Stressantworten und Signalwege wie NF‑κB durch den regulierten Abbau wichtiger Regulatoren. Die Proteasomaktivität beeinflusst die Immunüberwachung, indem sie Peptide für die MHC‑Klasse‑I‑Präsentation erzeugt, und wirkt sich auf die Stabilität von Proteinen aus, die an DNA‑Schadens‑ und Apoptose‑Signalwegen beteiligt sind. Eine fehlregulierte Proteasomfunktion und veränderte Expression von Proteasom‑Untereinheiten wurden mit Krebsbiologie, inflammatorischer Signalübertragung und neurodegenerativen Proteinaggregations‑Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch PSMB2 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur Proteostase und zellulären Anpassung darstellt.

Das 20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PSMB2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PSMB2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PSMB2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die 20S Proteasome β2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PSMB2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der 20S Proteasome β2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PSMB2-Exone abzielen, die für die 20S Proteasome β2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PSMB2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom 20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom 20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PSMB2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das 20S Proteasome β2 HDR-Plasmid (h) und 20S Proteasome β2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PSMB2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PSMB2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.