20S Proteasome β1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401676-ACT

PSMB1 codifica a subunidade catalítica β1 do núcleo do proteassoma 20S humano, que executa proteólise regulada como parte do complexo proteassoma 26S. Essa atividade é central para a renovação de proteínas dependente de ubiquitina, o processamento de antígenos para apresentação por MHC classe I e a manutenção da proteostase durante o estresse celular. A função do proteassoma integra-se ao controle do ciclo celular, às respostas a danos no DNA e às vias de sinalização inflamatória ao modular a abundância de proteínas reguladoras-chave. A atividade desregulada do proteassoma e alterações na expressão de PSMB1 são frequentemente estudadas no contexto de programas de sobrevivência de células cancerosas, estresse proteotóxico em doenças neurodegenerativas e fenótipos relacionados ao sistema imune.

20S Proteasome β1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSMB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

20S Proteasome β1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSMB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSMB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de 20S Proteasome β1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSMB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de 20S Proteasome β1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via 20S Proteasome β1 em células tumorais com expressão de PSMB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.