Plasmide Double Nickase (h) 15-LO2: sc-404699-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 15-LO2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 15-LO2 Double Nickase (h) et le plasmide 15-LO2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALOX15B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 15-LO2 Antibody (F-10): sc-376795
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 15-LO2 | sc-404699-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 15-LO2 | sc-404699-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **ALOX15B** code la **15-lipoxygénase-2 (15-LO2)**, une dioxygénase à fer non héminique qui oxygène les acides gras polyinsaturés pour générer des médiateurs lipidiques bioactifs, tels que le **15-HETE** à partir de l’acide arachidonique. En régulant les réseaux d’éicosanoïdes et de médiateurs spécialisés pro-résolutifs, la 15-LO2 influence la signalisation inflammatoire, la différenciation épithéliale, l’homéostasie rédox et le remodelage des lipides membranaires. L’activité d’ALOX15B s’inscrit à l’interface du métabolisme de l’acide arachidonique, de la signalisation PPAR et des voies induites par les cytokines qui façonnent les réponses tissulaires aux lésions et aux signaux immunitaires. Une expression dérégulée ou des profils altérés de produits lipidiques ont été associés à des pathologies liées à l’inflammation ainsi qu’à des modifications du comportement des cellules épithéliales en contexte cancéreux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation lipidique.
15-LO2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALOX15B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALOX15B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALOX15B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALOX15B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.