Plasmide CRISPR d'Activation (h) 11β-HSD2: sc-401400-ACT

HSD11B2 code la 11β-HSD2, une déshydrogénase microsomale dépendante du NAD+ qui inactive les glucocorticoïdes en convertissant le cortisol en cortisone, protégeant ainsi la spécificité du récepteur des minéralocorticoïdes dans les épithéliums sensibles à l’aldostérone. Cette enzyme joue un rôle majeur dans l’homéostasie des hormones stéroïdiennes et dans la régulation locale, en amont du récepteur, de la signalisation des glucocorticoïdes, en influençant des programmes transcriptionnels qui contrôlent le transport des électrolytes et le tonus vasculaire. Des altérations de l’expression ou de l’activité de HSD11B2 ont été associées à une perturbation du métabolisme du cortisol et à des phénotypes d’hyperactivation du récepteur des minéralocorticoïdes, établissant un lien mécanistique avec la régulation de la pression artérielle et la gestion rénale du sodium. Le gène est également étudié dans le placenta et les tissus cardiovasculaires, où des gradients de glucocorticoïdes spécifiques à chaque tissu façonnent des voies du développement et de réponse au stress.

11β-HSD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSD11B2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

11β-HSD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSD11B2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSD11B2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 11β-HSD2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSD11B2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 11β-HSD2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 11β-HSD2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HSD11B2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.