Plasmide CRISPR d'Activation (h) μ-protocadherin: sc-406015-ACT

CDHR5 code la μ-protocadhérine, une molécule d’adhérence cellule–cellule dépendante du calcium, enrichie dans les tissus épithéliaux polarisés où elle contribue à l’organisation des jonctions et au maintien de l’architecture apico-basale. En modulant les contacts adhésifs et le couplage au cytosquelette, la μ-protocadhérine influence les programmes de différenciation épithéliale et les processus liés à la fonction barrière qui façonnent l’homéostasie tissulaire. Une expression altérée de CDHR5 a été associée à une perturbation de l’intégrité épithéliale et à des phénotypes de remodelage pertinents pour la transformation oncogénique, les changements liés à l’invasion et d’autres aspects de la pathobiologie épithéliale. En tant que marqueur épithélial jouant des rôles fonctionnels aux interfaces cellulaires, CDHR5 est fréquemment étudié dans des travaux sur la signalisation dépendante de l’adhérence et les transitions d’état épithéliales.

μ-protocadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDHR5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

μ-protocadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDHR5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDHR5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de μ-protocadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDHR5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de μ-protocadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie μ-protocadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDHR5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.