μ-protocadherin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406015-ACT

CDHR5 kodiert μ‑Protocadherin, ein calciumabhängiges Zell‑Zell‑Adhäsionsmolekül, das in polarisierten Epithelgeweben angereichert ist und dort zur Organisation von Zellkontakten sowie zur Aufrechterhaltung der apikobasalen Architektur beiträgt. Durch die Modulation adhäsiver Kontakte und der Kopplung an das Zytoskelett beeinflusst μ‑Protocadherin epitheliale Differenzierungsprogramme und barrierebezogene Prozesse, die die Gewebehomöostase prägen. Eine veränderte CDHR5‑Expression wurde mit gestörter epithelialer Integrität und Remodeling‑Phänotypen in Verbindung gebracht, die für onkogene Transformation, invasionsassoziierte Veränderungen und andere Formen epithelialer Pathobiologie relevant sind. Als epithelialer Marker mit funktionellen Rollen an Zellgrenzflächen wird CDHR5 häufig in Studien zur adhäsionsabhängigen Signalübertragung und zu epithelialen Zustandsübergängen untersucht.

μ-protocadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDHR5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

μ-protocadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDHR5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDHR5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen μ-protocadherin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDHR5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von μ-protocadherin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des μ-protocadherin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDHR5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.