Plasmide CRISPR/Cas9 KO γS-crystallin (m): sc-419834

Présentation

Crygs code la γS-cristalline murine, une protéine structurale très abondante du cytoplasme du cristallin, qui contribue à la transparence du cristallin et à ses propriétés réfractives en stabilisant des assemblages protéiques densément compactés. En tant que membre de la superfamille des cristallines β/γ, la γS-cristalline soutient l’homéostasie protéique à long terme dans un environnement anucléé, où une altération du repliement, une agrégation ou des modifications post-traductionnelles peuvent perturber la transmission de la lumière à travers le cristallin. Le déséquilibre des cristallines interagit avec les voies de protéostasie, notamment le repliement assisté par des chaperonnes et les réponses au stress qui influencent la solubilité des protéines au cours de la vie. Les perturbations génétiques et biochimiques des cristallines sont largement utilisées pour modéliser des phénotypes d’opacification du cristallin et pour étudier les mécanismes à l’origine de l’agrégation protéique associée à la cataracte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γS-crystallin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Crygs dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Crygs, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Crygs à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γS-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Crygs pour l'étude de la signalisation de γS-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Crygs essentiels à la fonction de γS-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Crygs pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γS-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le γS-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Crygs. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γS-crystallin plasmide HDR (m) et le γS-crystallin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Crygs pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Crygs définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.