Plasmide CRISPR/Cas9 KO γC-crystallin (h): sc-402940

Présentation

CRYGC code la γC-cristalline humaine, une protéine structurale très abondante du cristallin qui contribue à la transparence et aux propriétés réfractives du cristallin en maintenant des assemblages protéiques solubles, densément empaquetés. En tant que membre de la famille des γ-cristallines, elle favorise la stabilité protéique à long terme dans les cellules des fibres du cristallin, terminalement différenciées et dépourvues de machinerie de renouvellement protéique. Une perturbation de l’homéostasie des cristallines favorise le mauvais repliement et l’agrégation des protéines, des processus associés à la perte de transparence du cristallin. Des variations génétiques ou une expression altérée de CRYGC ont été associées à des phénotypes de cataracte héréditaire, ce qui en fait une cible utile pour l’étude de la protéostasie et du développement du cristallin.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γC-crystallin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CRYGC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CRYGC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CRYGC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γC-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CRYGC pour l'étude de la signalisation de γC-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CRYGC essentiels à la fonction de γC-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CRYGC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γC-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le γC-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CRYGC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γC-crystallin plasmide HDR (h) et le γC-crystallin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CRYGC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CRYGC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.