γC-crystallin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402940

Descripción general

CRYGC codifica la γC-cristalina humana, una proteína estructural muy abundante del cristalino que contribuye a la transparencia y a las propiedades refractivas de la lente al mantener ensamblajes proteicos solubles y densamente empaquetados. Como miembro de la familia de las γ-cristalinas, favorece la estabilidad proteica a largo plazo en las células de fibra del cristalino, terminalmente diferenciadas, que carecen de maquinaria de recambio proteico. La alteración de la homeostasis de las cristalinas promueve el mal plegamiento y la agregación de proteínas, procesos asociados a la pérdida de claridad del cristalino. La variación genética o la expresión alterada de CRYGC se ha asociado con fenotipos de catarata hereditaria, lo que la convierte en un objetivo útil para estudiar la proteostasis y el desarrollo del cristalino.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO γC-crystallin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CRYGC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CRYGC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CRYGC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína γC-crystallin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CRYGC para la investigación de la señalización de γC-crystallin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CRYGC críticos para la función de γC-crystallin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CRYGC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido γC-crystallin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido γC-crystallin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CRYGC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR γC-crystallin (h) y el plásmido HDR γC-crystallin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CRYGC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CRYGC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.