Plasmide CRISPR/Cas9 KO γB-crystallin (m): sc-419829

Présentation

Crygb code la γB‑cristalline, une cristalline structurale fortement exprimée du cristallin de l’œil des vertébrés, qui contribue à l’indice de réfraction et à la transparence durable du cristallin. En tant que membre de la superfamille des βγ‑cristallines, la γB‑cristalline participe au réseau protéique dense qui maintient l’architecture des cellules fibreuses du cristallin et résiste à l’agrégation sous l’effet du stress oxydatif et d’autres stress protéotoxiques. La perturbation de l’homéostasie des cristallines est associée à une solubilité protéique altérée, à une organisation défectueuse des cellules fibreuses et à des phénotypes de diffusion de la lumière, pertinents pour des processus de type cataracte. Crygb chez la souris constitue donc un point d’entrée génétique utile pour étudier le développement du cristallin, les voies de protéostasie et les mécanismes de stabilité et de comportement de phase des cristallines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γB-crystallin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Crygb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Crygb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Crygb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γB-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Crygb pour l'étude de la signalisation de γB-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Crygb essentiels à la fonction de γB-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Crygb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γB-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le γB-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Crygb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γB-crystallin plasmide HDR (m) et le γB-crystallin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Crygb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Crygb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.