Plasmide CRISPR/Cas9 KO γB-crystallin (h): sc-402939

Présentation

CRYGB code la γB-cristalline, une protéine structurale soluble et très abondante du cristallin chez les vertébrés, qui contribue à l’indice de réfraction et à la transparence durable du cristallin. La γB-cristalline participe à l’assemblage du réseau des cristallines et aux processus d’homéostasie protéique qui maintiennent l’intégrité des cellules fibreuses du cristallin, où un empaquetage serré et une grande stabilité sont essentiels pour minimiser la diffusion de la lumière. Une altération de la stabilité des cristallines ou une susceptibilité accrue à l’agrégation est associée à des phénotypes d’opacification du cristallin, faisant de CRYGB un locus pertinent pour étudier les mécanismes de mauvais repliement des protéines et de protéostasie dans des tissus oculaires différenciés. Comme les cellules fibreuses du cristallin sont en grande partie post-mitotiques, CRYGB constitue également un modèle pour étudier la manière dont des protéines à longue durée de vie répondent, au fil du temps, au stress oxydatif et aux agressions environnementales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γB-crystallin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CRYGB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CRYGB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CRYGB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γB-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CRYGB pour l'étude de la signalisation de γB-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CRYGB essentiels à la fonction de γB-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CRYGB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γB-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le γB-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CRYGB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γB-crystallin plasmide HDR (h) et le γB-crystallin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CRYGB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CRYGB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.