Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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γ1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h): sc-403986-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das γ1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- γ1-Adaptin Double-Nickase-Plasmid (h) und γ1-Adaptin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AP1G1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: γ1-Adaptin: sc-398867
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
γ1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403986-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
γ1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403986-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP1G1 kodiert die humane γ1-Adaptin‑Untereinheit des AP‑1‑Adaptorproteinkomplexes, eine zentrale Komponente des clathrinvermittelten vesikulären Transports am trans‑Golgi‑Netzwerk und in Endosomen. γ1‑Adaptin trägt dazu bei, Sortiersignale von Frachtproteinen mit dem Aufbau des Clathrinmantels zu koppeln, und unterstützt so die Bildung von Transportvesikeln, die Rezeptorrecycling, lysosomale Zustellung und die polarisierte Verteilung von Membranproteinen regulieren. Über seine Funktionen in der endosomalen Sortierung und im intrazellulären Transport beeinflusst AP1G1 die Homöostase von Signalrezeptoren und die Membranzusammensetzung – Prozesse, die häufig in Studien zu Neurobiologie, Immunität und zellulären Stressantworten untersucht werden. Eine Fehlregulation der Adaptor‑Komplex‑Funktion und endosomaler Transportwege wurde mit Entwicklungs‑ und neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht und kann die Anfälligkeit für Pathogeneintritt und ‑replikation modulieren, wodurch AP1G1 ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Pathway‑Forschung ist.
γ1-Adaptin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AP1G1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AP1G1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AP1G1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AP1G1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.