ΔN p73 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-437274-ACT

Humanes ΔN p73 ist eine N-terminal verkürzte TP73-Isoform, die Transkriptionsprogramme moduliert, welche Zellzyklusprogression, Apoptoseresistenz, Differenzierung und zelluläre Stressantworten steuern. Durch das Fehlen der kanonischen Transaktivierungsdomäne kann ΔN p73 gegenüber Mitgliedern der p53-Familie dominant-negativ wirken und so nachgeschaltete Signalnetzwerke umgestalten, die DNA-Schadensantworten und die mitochondriale Apoptose regulieren. Eine veränderte ΔN‑p73-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit dysregulierter Proliferation und Überlebensphänotypen in Verbindung gebracht, darunter Tumorbiologie und neuroentwicklungsbezogene Prozesse. Seine Aktivität überschneidet sich mit Checkpoint-Kontrolle, Chromatinregulation und linienspezifischer Genexpression, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Umprogrammierung von p53-Familien-Signalwegen macht.

ΔN p73 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen -Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ΔN p73 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des -Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ΔN p73-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native -Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ΔN p73-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ΔN p73-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem -Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.