Plasmide CRISPR d'Activation (h) ΔN p73: sc-437274-ACT

Le ΔN p73 humain est un isoforme de TP73 tronqué à l’extrémité N-terminale qui module des programmes transcriptionnels contrôlant la progression du cycle cellulaire, la résistance à l’apoptose, la différenciation et les réponses cellulaires au stress. En l’absence du domaine canonique de transactivation, ΔN p73 peut agir de manière dominant-négative vis-à-vis des membres de la famille p53, remodelant les réseaux de signalisation en aval qui régissent les réponses aux dommages de l’ADN et l’apoptose mitochondriale. Une expression altérée de ΔN p73 a été associée à une prolifération et à des phénotypes de survie dérégulés dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment en biologie tumorale et dans les processus de neurodéveloppement. Son activité croise le contrôle des points de contrôle, la régulation de la chromatine et l’expression génique spécifique de lignée, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le recâblage des voies de la famille p53.

ΔN p73 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ΔN p73 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ΔN p73. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ΔN p73 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ΔN p73 dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.