Plasmide CRISPR/Cas9 KO δ-casein (m): sc-419849

Présentation

Csn1s2b code la δ-caséine, une protéine lactée sécrétée exprimée dans la glande mammaire, qui contribue à la structure des micelles de caséine ainsi qu’à la liaison du calcium et du phosphate pendant la lactation. En tant que composante du cluster de gènes des caséines, sa transcription est étroitement régulée au cours de la gestation et de la lactation par la signalisation prolactine/JAK2–STAT5 et d’autres voies sensibles aux hormones qui coordonnent la synthèse et la sécrétion des protéines du lait. Les modifications des profils d’expression des caséines sont utilisées comme indicateurs de la différenciation de l’épithélium mammaire et de la compétence lactogène, et les gènes de la famille des caséines sont fréquemment suivis dans les études sur le développement de la glande mammaire et les réponses au stress. Dans des modèles murins, la perturbation des composants des caséines peut éclairer les mécanismes qui sous-tendent la composition du lait, la nutrition néonatale et les phénotypes liés à la lactation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO δ-casein (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Csn1s2b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Csn1s2b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Csn1s2b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine δ-casein.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Csn1s2b pour l'étude de la signalisation de δ-casein, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Csn1s2b essentiels à la fonction de δ-casein
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Csn1s2b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le δ-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le δ-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Csn1s2b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le δ-casein plasmide HDR (m) et le δ-casein (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Csn1s2b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Csn1s2b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.