Plasmide CRISPR/Cas9 KO β-tectorin (m): sc-423332

Présentation

Tectb code la β-tectorine, une glycoprotéine sécrétée qui contribue à l’architecture de la matrice extracellulaire de la membrane tectoriale de l’oreille interne, où elle aide à organiser des assemblages supramoléculaires importants pour la mécanique cochléaire. En modulant le couplage biomécanique entre la membrane tectoriale et les stéréocils des cellules ciliées, la β-tectorine favorise une mécanotransduction mécanoélectrique efficace et la signalisation déclenchée par les sons. La perturbation des composants matriciels de la membrane tectoriale, y compris les réseaux associés à la β-tectorine, est liée à des modifications des seuils auditifs et à des phénotypes de surdité neurosensorielle, ce qui fait de Tectb un locus utile pour étudier la régulation, dépendante de la matrice, de la fonction sensorielle. Dans des modèles murins, la perturbation de Tectb permet d’analyser l’assemblage de la matrice extracellulaire, la sécrétion épithéliale et les relations structure–fonction à la base du traitement auditif.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β-tectorin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tectb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tectb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tectb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β-tectorin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tectb pour l'étude de la signalisation de β-tectorin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tectb essentiels à la fonction de β-tectorin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tectb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β-tectorin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le β-tectorin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tectb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β-tectorin plasmide HDR (m) et le β-tectorin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tectb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tectb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.