Plasmide CRISPR/Cas9 KO βPAK (m): sc-422108

Présentation

Pak3 code la βPAK (p21-activated kinase 3), une kinase sérine/thréonine activée en aval des GTPases de la famille Rho RAC1 et CDC42. La βPAK coordonne le remodelage du cytosquelette d’actine, la croissance des neurites et la signalisation synaptique via des voies qui recoupent la signalisation MAPK/ERK, la dynamique de l’adhérence cellulaire et la plasticité neuronale dépendante de l’activité. Chez la souris, la fonction de Pak3 est particulièrement pertinente pour l’étude du développement du système nerveux et du fonctionnement des circuits, où une altération de la signalisation PAK peut affecter la morphologie des épines dendritiques et la connectivité synaptique. La dérégulation de la signalisation de la famille PAK a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et cognitifs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation neuronale et du contrôle du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO βPAK (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pak3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pak3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pak3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine βPAK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pak3 pour l'étude de la signalisation de βPAK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pak3 essentiels à la fonction de βPAK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pak3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le βPAK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le βPAK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pak3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le βPAK plasmide HDR (m) et le βPAK (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pak3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pak3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.