Plásmido CRISPR de Activación (h) β-NAP: sc-411126-ACT

El gen humano **AP3B2** codifica **β-NAP**, la subunidad beta enriquecida en neuronas del complejo de proteínas adaptadoras 3 (**AP-3**), que media la selección de carga y el tráfico desde la red trans-Golgi y los compartimentos endosomales hacia los lisosomas y orgánulos relacionados. β-NAP favorece la formación y el direccionamiento de vesículas críticas para la biogénesis de vesículas sinápticas y la secreción regulada, vinculando a AP3B2 con la clasificación endolisosomal, la localización de proteínas de membrana y la homeostasis neuronal. La alteración del tráfico dependiente de AP-3 puede modificar la liberación de neurotransmisores y la maduración de orgánulos, lo que convierte a AP3B2 en un nodo relevante para estudiar mecanismos asociados al neurodesarrollo y a la neurodegeneración. Por ello, la expresión y la función de AP3B2 se utilizan ampliamente como lecturas de referencia en vías que implican transporte vesicular, función sináptica y dinámica endosomal-lisosomal.

β-NAP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AP3B2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-NAP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AP3B2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AP3B2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-NAP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AP3B2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-NAP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-NAP en células tumorales con expresión de AP3B2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.