Plasmide Double Nickase (h) β-glucuronidase: sc-404187-NIC

GUSB code la β‑glucuronidase humaine, une hydrolase lysosomale qui clive les résidus d’acide β‑D‑glucuronique des glycosaminoglycanes et d’autres glucuronides lors du renouvellement des macromolécules. Cette enzyme est au cœur des voies cataboliques dépendantes du lysosome, contribuant à l’homéostasie cellulaire grâce à un trafic coordonné, à l’acidification et à la dégradation des substrats. Une perturbation de l’activité de GUSB dérègle le métabolisme des glycosaminoglycanes et la fonction lysosomale, ce qui en fait un gène clé pour l’étude de la biologie des maladies de surcharge lysosomale et des dérégulations métaboliques associées. En tant qu’enzyme marqueur lysosomal largement utilisée, la β‑glucuronidase fournit également une mesure fonctionnelle de la biogenèse des lysosomes et de la clairance des substrats dans des modèles cellulaires.

β-glucuronidase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GUSB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GUSB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GUSB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GUSB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.