Plasmide CRISPR/Cas9 KO β-FR (h): sc-403346

Présentation

FOLR2 code le récepteur bêta des folates (β‑FR), un récepteur de surface cellulaire ancré par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui se lie aux folates et en médie l’absorption, soutenant le métabolisme à un carbone et la biosynthèse des nucléotides. En régulant la disponibilité intracellulaire en folates, β‑FR influence la synthèse de l’ADN ainsi que des processus dépendants de la méthylation, en interaction avec des programmes de prolifération et de différenciation. Chez l’humain, FOLR2 est fréquemment utilisé comme marqueur de sous-populations spécifiques de cellules myéloïdes et de macrophages, et il est étudié dans des contextes où le métabolisme dépendant des folates et l’état des cellules immunitaires sont remodelés. Des profils d’expression altérés de FOLR2 sont associés à des microenvironnements inflammatoires et à un remodelage immunitaire pertinent pour diverses maladies, ce qui motive des études mécanistiques dans des cellules primaires et des systèmes modèles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β-FR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FOLR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FOLR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FOLR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β-FR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FOLR2 pour l'étude de la signalisation de β-FR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FOLR2 essentiels à la fonction de β-FR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FOLR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β-FR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β-FR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FOLR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β-FR plasmide HDR (h) et le β-FR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FOLR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FOLR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.