Plasmide CRISPR d'Activation (h) β-FR: sc-403346-ACT

FOLR2 code le récepteur bêta des folates (β-FR), une protéine de surface cellulaire ancrée par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui se lie aux folates réduits et médie une capture dépendante du récepteur afin de soutenir le métabolisme à un carbone. En régulant la disponibilité intracellulaire en folates, β-FR influence la biosynthèse des nucléotides et les réactions de méthylation, étroitement liées à la prolifération et à la différenciation cellulaires. FOLR2 est enrichi dans les cellules de la lignée myéloïde, notamment dans certains sous-ensembles de monocytes et de macrophages, et est couramment utilisé comme marqueur de l’état des macrophages et de la biologie immunitaire tissulaire. Des altérations de l’expression de FOLR2 ont été associées à des microenvironnements inflammatoires et à des phénotypes myéloïdes associés aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour les études de régulation immunitaire et de biologie du cancer.

β-FR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOLR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β-FR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOLR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOLR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β-FR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOLR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β-FR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β-FR dans les cellules tumorales présentant une expression de FOLR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.