Plasmide CRISPR d'Activation (h) β Enolase: sc-400843-ACT

ENO3 code l’énolase β humaine, une enzyme glycolytique enrichie dans le muscle qui catalyse l’interconversion du 2‑phosphoglycérate et du phosphoénolpyruvate, soutenant la production d’ATP lors de fortes demandes métaboliques. En tant que composante du métabolisme central du carbone, l’énolase β relie la glycolyse à l’homéostasie énergétique globale et peut influencer l’équilibre rédox cellulaire via l’utilisation du pyruvate en aval. Des modifications de l’expression d’ENO3 et du flux glycolytique ont été étudiées dans des contextes de dysfonctionnement du muscle squelettique, de remodelage métabolique et de changements liés aux maladies vers une glycolyse aérobie. ENO3 constitue donc un marqueur et un modulateur utile pour des études reliant le métabolisme énergétique aux réponses au stress cellulaire et aux états de différenciation.

β Enolase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ENO3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β Enolase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ENO3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ENO3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β Enolase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ENO3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β Enolase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β Enolase dans les cellules tumorales présentant une expression de ENO3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.