Plasmide Double Nickase (h) β-casein: sc-402248-NIC

CSN2 code la β‑caséine humaine, une phosphoprotéine majeure sécrétée dans le lait, qui contribue à la formation des micelles et facilite l’apport de calcium, de phosphate et de peptides bioactifs pendant la lactation. Son expression est étroitement régulée dans l’épithélium mammaire par la signalisation des hormones lactogènes, en particulier l’axe prolactine–JAK2/STAT5, avec une contribution supplémentaire du récepteur des glucocorticoïdes et des voies insuline/PI3K, qui coordonnent la différenciation et la fonction sécrétoire. Une régulation altérée de la β‑caséine est largement utilisée comme indicateur de l’état de différenciation de l’épithélium mammaire et des programmes transcriptionnels associés à la lactation, faisant de CSN2 un marqueur moléculaire utile dans les études du développement de la glande mammaire et du contrôle endocrinien de l’expression génique. Des réseaux de gènes des protéines du lait dérégulés, incluant CSN2, sont fréquemment étudiés dans des contextes tels qu’une physiologie de lactation altérée et des modifications des programmes de lignée épithéliale pertinentes pour la recherche en biologie mammaire.

β-casein Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSN2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.