Plasmide Double Nickase (h) βB2-crystallin: sc-403626-NIC

CRYBB2 code la βB2-cristalline humaine, une protéine structurelle majeure du cristallin qui soutient l’architecture des cellules des fibres du cristallin et sa transparence à long terme. En tant que membre de la superfamille des β/γ-cristallines, la βB2-cristalline contribue à la forte densité d’empilement protéique et aux propriétés réfractives, tout en maintenant la protéostasie grâce à des interactions de type chaperon qui limitent l’agrégation lors de stress oxydatif et du vieillissement. Une expression altérée de CRYBB2 ou une déstabilisation de la protéine est associée à une perturbation de l’homéostasie du cristallin et à des phénotypes liés à la cataracte, ce qui en fait un modèle utile pour étudier la stabilité des protéines, les réponses au stress et les programmes de différenciation du cristallin. La βB2-cristalline constitue également un système aisément exploitable pour examiner la manière dont des réseaux de cristallines conservés réagissent à un déséquilibre rédox et à un stress protéotoxique, dans des contextes cellulaires oculaires et extra-oculaires.

βB2-crystallin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRYBB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRYBB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRYBB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRYBB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.