Plásmido Doble Nickase (h) βB1-crystallin: sc-403361-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)βB1-crystallin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa βB1-crystallin (h) y el plásmido de doble nickasa βB1-crystallin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CRYBB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: βB1-crystallin Anticuerpo (A-8): sc-374496
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) βB1-crystallin | sc-403361-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) βB1-crystallin | sc-403361-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYBB1 codifica la βB1-cristalina humana, una proteína estructural principal del cristalino ocular que contribuye al alto índice de refracción y a la transparencia a largo plazo necesarios para la visión. La βB1-cristalina participa en la red de proteínas cristalinas formando oligómeros estables con otras β/γ-cristalinas, lo que sostiene la arquitectura de las células de las fibras del cristalino y la homeostasis proteica. La alteración del ensamblaje de las cristalinas o una mayor susceptibilidad a la agregación pueden comprometer la claridad del cristalino, lo que convierte a CRYBB1 en un locus clave para estudiar la proteostasis, las respuestas al estrés y los cambios relacionados con la edad en la biología del cristalino. Se han vinculado variantes que afectan la estabilidad y la solubilidad de la βB1-cristalina con fenotipos de catarata hereditaria, aportando un contexto genético para estudios mecanísticos en modelos oculares.
βB1-crystallin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRYBB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRYBB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRYBB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRYBB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.