Plásmido Doble Nickase (h) β-Arrestin-2: sc-416686-NIC

ARRB2 codifica la β-arrestina-2 humana, un adaptador multifuncional que termina y remodela la señalización aguas abajo de los GPCR activados al promover la desensibilización, la internalización y el tráfico del receptor. Más allá del desacoplamiento canónico de la proteína G, la β-arrestina-2 actúa como andamiaje de módulos de señalización como MAPK/ERK, PI3K–AKT y NF-κB, influyendo así en programas transcripcionales, la dinámica del citoesqueleto y las respuestas inflamatorias. También interactúa con la maquinaria endocítica y con vías de ubiquitinación para regular el destino del receptor y la duración de la señal. La desregulación de la señalización sesgada hacia β-arrestina y la alteración de la expresión de ARRB2 se han implicado en diversos procesos relevantes para la enfermedad, como la señalización asociada a tumores, la activación de células inmunitarias, la fibrosis y fenotipos neuropsiquiátricos y metabólicos.

β-Arrestin-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARRB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARRB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARRB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARRB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.