β-Arrestin-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416686-ACT

ARRB2 kodiert β-Arrestin-2, ein multifunktionales Adapterprotein, das die Desensibilisierung, Internalisierung und den Transport G‑Protein‑gekoppelter Rezeptoren (GPCR) nach einer durch GRKs vermittelten Rezeptorphosphorylierung reguliert. Über die bloße Beendigung der G‑Protein-Signalübertragung hinaus dient β‑Arrestin‑2 als Gerüstprotein für Signalkomplexe, die MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und NF‑κB‑Signalwege modulieren und damit Signaldauer und subzelluläre Lokalisation beeinflussen. Über diese Interaktionen wirkt ARRB2 auf Zellmigration, inflammatorische Signalgebung und receptor‑biased signaling in unterschiedlichen GPCR-Systemen ein. Fehlregulierte β‑Arrestin‑abhängige Signalwege wurden in der Literatur mit krebsassoziierten Signalnetzwerken, der kardiometabolischen Regulation und neuroimmunen Prozessen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in pathway‑fokussierten Studien stützt.

β-Arrestin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARRB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

β-Arrestin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARRB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARRB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen β-Arrestin-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARRB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von β-Arrestin-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des β-Arrestin-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARRB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.