Particules Lentivirales d'Activation (h) β-Amyloid: sc-400520-LAC

APP code la protéine précurseur de l’amyloïde, une glycoprotéine transmembranaire de type I qui subit un traitement séquentiel par les sécrétases α, β et γ afin de générer de multiples fragments bioactifs, dont les peptides β-amyloïdes. Le trafic d’APP au sein des systèmes sécrétoire et endo-lysosomal la relie au renouvellement membranaire, à la fonction synaptique, à la croissance des neurites et à l’adhésion cellulaire, tandis que le clivage dépendant des sécrétases associe la biologie d’APP à la protéolyse intramembranaire régulée. Un traitement amyloïdogène dérégulé et une homéostasie d’Aβ altérée constituent des caractéristiques moléculaires centrales étudiées dans la maladie d’Alzheimer et l’angiopathie amyloïde cérébrale, et l’expression d’APP est également examinée dans des contextes de réponses au stress neuronal et de protéostasie. Les modèles in vitro interrogent fréquemment les interactions de la voie d’APP avec le métabolisme du cholestérol, le tri endosomal, la fonction autophagie–lysosome et la signalisation inflammatoire dans les cellules gliales et neuronales.

Les particules d'activation lentivirales β-Amyloid (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de APP dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales β-Amyloid (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription APP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de β-Amyloid. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif APP ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.