Plasmide CRISPR/Cas9 KO β8 Tubulin (h): sc-401438

Présentation

TUBB8 code la β8-tubuline, un isotype de la β-tubuline qui polymérise avec l’α-tubuline pour former des microtubules, soutenant l’architecture du cytosquelette, le transport intracellulaire et la dynamique du fuseau lors de la division cellulaire. Le remodelage des microtubules sous-tend des processus tels que la mitose, le positionnement des organites et la polarité cellulaire, via une régulation coordonnée par les protéines associées aux microtubules et par des modifications post-traductionnelles de la tubuline. Une composition altérée en isotypes de tubuline peut influencer la stabilité des microtubules et la sensibilité aux stress ciblant les microtubules, reliant ainsi la biologie de la tubuline à des défauts de ségrégation des chromosomes et d’homéostasie cellulaire. TUBB8 a été étudié dans le contexte de phénotypes reproductifs et du développement où l’organisation des microtubules est essentielle, offrant un modèle pour disséquer les contributions spécifiques des isotypes à la fonction des microtubules.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β8 Tubulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUBB8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUBB8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUBB8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β8 Tubulin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUBB8 pour l'étude de la signalisation de β8 Tubulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUBB8 essentiels à la fonction de β8 Tubulin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUBB8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β8 Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β8 Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUBB8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β8 Tubulin plasmide HDR (h) et le β8 Tubulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUBB8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUBB8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.