β4 Tubulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400058

Panoramica

TUBB4A codifica la β4-tubulina, un’isotipo di β-tubulina arricchito nei neuroni che polimerizza con l’α-tubulina per formare i microtubuli, supportando l’architettura del fuso mitotico, il trasporto intracellulare e la crescita dei neuriti. Il ricambio dinamico dei microtubuli è alla base di processi quali il trasporto assonale e il rimodellamento del citoscheletro, integrandosi con vie che coordinano la progressione del ciclo cellulare e la differenziazione neuronale. Un’alterata funzione di TUBB4A compromette l’assemblaggio e la stabilità dei microtubuli, collegando questo gene a fenotipi di tipo neuroevolutivo e neurodegenerativo negli studi genetici. In quanto componente fondamentale del citoscheletro, la β4-tubulina offre un punto di accesso meccanicistico per indagare la segnalazione dipendente dai microtubuli e la vulnerabilità allo stress del citoscheletro in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β4 Tubulin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TUBB4A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TUBB4A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TUBB4A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β4 Tubulin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TUBB4A per lo studio della segnalazione di β4 Tubulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TUBB4A critici per la funzione di β4 Tubulin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TUBB4A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β4 Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β4 Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TUBB4A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β4 Tubulin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β4 Tubulin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TUBB4A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TUBB4A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.