Plasmide CRISPR/Cas9 KO β3Gn-T2 (m): sc-424741

Présentation

B3gnt2 code la β3Gn-T2, une β1,3-N-acétylglucosaminyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui allonge les chaînes de poly‑N‑acétyllactosamine sur les N‑ et O‑glycanes ainsi que sur les glycosphingolipides. En façonnant la ramification et l’élongation des glycannes, la β3Gn-T2 influence des événements de reconnaissance médiés par les lectines, notamment la liaison des galectines, susceptibles d’affecter l’adhésion cellulaire, la migration et l’organisation des récepteurs à la membrane plasmique. La glycosylation dépendante de B3gnt2 contribue à la régulation des signalisations immunitaires et inflammatoires et module la composition du glycocalyx dans de nombreux tissus. Dans la littérature, une expression ou une activité altérée des enzymes de la famille β3Gn-T a été associée à une dérégulation des interactions cellule–cellule et à des phénotypes pertinents pour la biologie tumorale et les dysfonctions immunitaires, ce qui étaye des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β3Gn-T2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène B3gnt2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du B3gnt2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert B3gnt2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β3Gn-T2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en B3gnt2 pour l'étude de la signalisation de β3Gn-T2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de B3gnt2 essentiels à la fonction de β3Gn-T2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de B3gnt2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β3Gn-T2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le β3Gn-T2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus B3gnt2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β3Gn-T2 plasmide HDR (m) et le β3Gn-T2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie B3gnt2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles B3gnt2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.