Plasmide Double Nickase (h) β3 Tubulin: sc-400525-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) β3 Tubulin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide β3 Tubulin Double Nickase (h) et le plasmide β3 Tubulin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TUBB3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: β3 Tubulin Antibody (2G10): sc-80005
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) β3 Tubulin | sc-400525-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) β3 Tubulin | sc-400525-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBB3 code la β3-tubuline humaine, un isotype de β-tubuline enrichi dans les neurones qui polymérise avec l’α-tubuline pour former des microtubules, soutenant la dynamique du fuseau mitotique, la croissance axonale, le transport intracellulaire et le remodelage du cytosquelette. La β3-tubuline participe à des processus dépendants des microtubules qui façonnent la polarité et la migration cellulaires, et influence le trafic vésiculaire via des interactions avec des protéines motrices. Une expression altérée de TUBB3 ou des modifications de la composition en isotypes de tubuline ont été associées à des phénotypes du neurodéveloppement ainsi qu’à la biologie des cancers, où la régulation du réseau de microtubules recoupe des voies de prolifération, d’invasion et de réponse aux médicaments. En tant que marqueur de la différenciation neuronale et de l’état du cytosquelette, TUBB3 est largement étudié dans des modèles d’engagement de lignée neurale et de plasticité des cellules tumorales.
β3 Tubulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TUBB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TUBB3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TUBB3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TUBB3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.