Plasmide CRISPR d'Activation (h) β2C Tubulin: sc-400056-ACT

TUBB4B code la tubuline β2C, un isotype central de β‑tubuline qui polymérise avec les α‑tubulines pour former les microtubules, assurant le soutien de l’architecture du cytosquelette, le transport intracellulaire et l’assemblage du fuseau mitotique. La dynamique des microtubules, portée par les hétérodimères de tubuline, régule la progression du cycle cellulaire, le trafic vésiculaire et l’organisation des prolongements neuronaux via des voies impliquant des protéines motrices telles que les kinésines et les dynéines. Les modifications de l’expression des isotypes de tubuline et le remodelage des microtubules sont fréquemment étudiés dans les contextes d’instabilité chromosomique, d’altération de la polarité cellulaire et de réponses au stress accompagnant la transformation oncogénique. Parce que les microtubules sont au cœur de la division et de la migration, TUBB4B est largement pertinent pour la recherche sur la régulation du cytosquelette, la différenciation et les phénotypes dictés par le microenvironnement.

β2C Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TUBB4B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β2C Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TUBB4B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TUBB4B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β2C Tubulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TUBB4B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β2C Tubulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β2C Tubulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TUBB4B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.