Plasmide CRISPR d'Activation (h) β2B Tubulin: sc-400059-ACT

TUBB2B code la β2B‑tubuline humaine, un isotype de β‑tubuline enrichi dans les neurones, qui s’hétérodimérise avec l’α‑tubuline pour former des microtubules soutenant l’architecture du cytosquelette, le transport intracellulaire et la dynamique du fuseau mitotique. Dans le système nerveux en développement comme à l’âge adulte, la β2B‑tubuline contribue à la croissance des neurites, au guidage axonal et à la migration neuronale via des processus dépendants des microtubules et une coordination avec les protéines motrices et les protéines associées aux microtubules. La dynamique des microtubules, régulée par la composition en isotypes de tubuline, interfère avec des voies qui contrôlent la polarité et la division cellulaires, notamment la signalisation des GTPases Rho et l’organisation médiée par le centrosome. Des variations pathogènes ou une expression dérégulée de TUBB2B ont été associées à des troubles du neurodéveloppement caractérisés par une organisation corticale altérée et une différenciation neuronale déficiente, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles neuronaux.

β2B Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TUBB2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β2B Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TUBB2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TUBB2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β2B Tubulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TUBB2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β2B Tubulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β2B Tubulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TUBB2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.