Particules Lentivirales d'Activation (h) β-1,4-GalNAc-T4: sc-410420-LAC

B4GALNT4 code la bêta-1,4-GalNAc-T4, une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui transfère la N‑acétylgalactosamine à des glycoconjugués, façonnant ainsi les structures glucidiques terminales des glycoprotéines et des glycolipides. Par son rôle dans la glycosylation des protéines et des lipides, la bêta-1,4-GalNAc-T4 influence l’organisation membranaire, le trafic des récepteurs et les processus de reconnaissance cellule–cellule, en interaction avec le fonctionnement de la voie sécrétoire. Des programmes de glycosylation altérés sont fréquemment associés à une adhésion et une signalisation dérégulées dans des maladies complexes, faisant de B4GALNT4 une cible utile pour explorer comment le remodelage des glycannes affecte les phénotypes cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales β-1,4-GalNAc-T4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de B4GALNT4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales β-1,4-GalNAc-T4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription B4GALNT4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de β-1,4-GalNAc-T4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif B4GALNT4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.