β-1,4-GalNAc-T4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410420-ACT

B4GALNT4 kodiert die β-1,4-GalNAc-T4, eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die N‑Acetylgalactosamin auf Glykokonjugat-Akzeptoren überträgt und dadurch terminale Glykanstrukturen auf Glykoproteinen und Glykolipiden mitprägt. Über ihre Rolle in der Glykanbiosynthese und im Glykan-Remodeling kann β-1,4-GalNAc-T4 den Proteintransport, die Organisation von Rezeptoren sowie Zell‑Zell-Erkennungsprozesse beeinflussen, die von Mustern der Glykosylierung an der Zelloberfläche abhängen. Eine veränderte Expression oder Aktivität von GalNAc-Transferasen wird häufig im Zusammenhang mit dysregulierter Glykosylierung untersucht – einem Kennzeichen, das in der Krankheitsbiologie mit Veränderungen in Adhäsion, Signalübertragung und Immuninteraktionen verknüpft ist. Daher ist B4GALNT4 für die Forschung zu glykosylierungsabhängigen Signalwegen und zur Modulation von Phänotypen in humanen Zellmodellen relevant.

β-1,4-GalNAc-T4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen B4GALNT4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

β-1,4-GalNAc-T4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des B4GALNT4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der B4GALNT4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen β-1,4-GalNAc-T4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native B4GALNT4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von β-1,4-GalNAc-T4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des β-1,4-GalNAc-T4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem B4GALNT4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.