Particules Lentivirales d'Activation (h) β-1,4-GalNAc-T3: sc-415306-LAC

B4GALNT3 code pour la β-1,4-GalNAc-T3, une glycosyltransférase résidente du Golgi qui transfère la N‑acétylgalactosamine via une liaison β1,4 afin de générer, sur des glycoprotéines et des glycolipides, des motifs glycanes terminaux spécifiques de type LacdiNAc. En façonnant le branchement des glycannes et leurs structures terminales, la β‑1,4‑GalNAc‑T3 influence la stabilité des protéines, les interactions récepteur–ligand et l’adhésion cellule–cellule au sein de la voie sécrétoire et, plus largement, des réseaux de glycosylation. Une expression altérée de B4GALNT3 a été associée à des signatures de glycosylation dérégulées observées en cancérologie et dans des contextes inflammatoires, où des modifications des glycannes de surface peuvent moduler la signalisation et la reconnaissance immunitaire. Ce gène est donc pertinent pour étudier la régulation, dépendante du glyco‑code, du trafic membranaire, des interactions avec la matrice extracellulaire et de l’activité de récepteurs spécifiques de certaines voies.

Les particules d'activation lentivirales β-1,4-GalNAc-T3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de B4GALNT3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales β-1,4-GalNAc-T3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription B4GALNT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de β-1,4-GalNAc-T3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif B4GALNT3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.