Plásmido CRISPR de Activación (h) β-1,4-GalNAc-T3: sc-415306-ACT

B4GALNT3 codifica la β-1,4-GalNAc-T3 humana, una glicosiltransferasa localizada en el aparato de Golgi que transfiere N-acetilgalactosamina en un enlace β1,4 para generar epítopos glicánicos terminales específicos en glicoproteínas y glicolípidos. Al moldear los patrones de glicosilación en la superficie celular y en proteínas secretadas, la β-1,4-GalNAc-T3 influye en el tráfico de proteínas, las interacciones receptor–ligando y la señalización mediada por lectinas, que afectan la adhesión y la comunicación celular. La expresión o actividad alteradas de B4GALNT3 se han asociado con la remodelación desregulada de glicanos observada en la biología del cáncer y en otras afecciones en las que la glicosilación aberrante modula la proliferación, la invasión y el reconocimiento inmunitario. Por ello, este gen es relevante para estudios de vías dependientes de la glicosilación, la composición del glicocálix y los mecanismos que vinculan los programas enzimáticos del Golgi con fenotipos de enfermedad.

β-1,4-GalNAc-T3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de B4GALNT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-1,4-GalNAc-T3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus B4GALNT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional B4GALNT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-1,4-GalNAc-T3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo B4GALNT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-1,4-GalNAc-T3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-1,4-GalNAc-T3 en células tumorales con expresión de B4GALNT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.