α-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405876

概要

TECTAは、内耳の蓋膜（tectorial membrane）を構成する主要な非コラーゲン性糖タンパク質であるαテクトリンをコードしており、蝸牛有毛細胞の機械電気変換に必要な細胞外マトリックス構築の組織化に寄与します。αテクトリンは膜の剛性や微小力学特性に関与し、ステレオシリアの偏位や周波数選択性（周波数チューニング）を支えることで、細胞外マトリックスの組み立てやプロテオスタシス過程と聴覚シグナル伝達を結び付けます。TECTAの変異は遺伝性難聴の表現型と関連しており、蝸牛の細胞外マトリックスにおける遺伝子型―構造―機能の関係を研究するうえで重要な標的です。αテクトリン機能の喪失は、蓋膜の発生、有毛細胞の生体力学、ならびに聴覚経路の生理機能に関するモデルで一般的に検討されています。

α-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTECTA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TECTA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TECTAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-tectorinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α-tectorinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TECTA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α-tectorinの機能に不可欠なTECTAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TECTAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびα-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TECTA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α-tectorin HDRプラスミド（h）および α-tectorin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTECTAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTECTA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。