α_2C-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419025

Übersicht

Adra2c kodiert den murinen α2C-AR, einen inhibitorischen, G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor für Katecholamine, der vor allem an Gi/Go koppelt, um die Adenylylcyclase-Aktivität zu hemmen, die cAMP/PKA-Signalübertragung zu verringern und die Funktion von Ionenkanälen zu modulieren. Über die Regulation der präsynaptischen Neurotransmitterfreisetzung und des sympathischen Outputs beeinflusst der α2C-AR die synaptische Transmission, den Gefäßtonus und stressresponsive neuroendokrine Signalwege. Die Rezeptoraktivierung kann zudem βγ‑abhängige Signalwege einbinden, die die MAPK/ERK-Signalgebung und die zelluläre Erregbarkeit beeinflussen. Eine fehlregulierte adrenerge Signalübertragung unter Beteiligung von ADRA2C wurde mit neuropsychiatrischen Phänotypen und kardiovaskulären Prozessen in Verbindung gebracht, was dieses Gen für Studien zur autonomen Regulation und zur Funktion neuronaler Schaltkreise relevant macht.

Das α2C-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adra2c-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adra2c-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adra2c nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α2C-AR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adra2c-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α2C-AR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adra2c-Exone abzielen, die für die α2C-AR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adra2c-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α2C-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom α2C-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adra2c-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α2C-AR HDR-Plasmid (m) und α2C-AR HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adra2c-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adra2c-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.