Plasmide Double Nickase (h) α1D-AR: sc-402904-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) α1D-AR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide α1D-AR Double Nickase (h) et le plasmide α1D-AR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADRA1D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α1D-AR Antibody (F-10): sc-390884
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) α1D-AR | sc-402904-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) α1D-AR | sc-402904-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADRA1D code le récepteur adrénergique humain α1D (α1D-AR), un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) qui transmet préférentiellement le signal via Gq/11 afin d’activer la phospholipase C, d’augmenter le Ca2+ intracellulaire et de stimuler des programmes transcriptionnels dépendants de la PKC. α1D-AR contribue à la contractilité des muscles lisses et au tonus vasculaire, et module en aval la signalisation MAPK/ERK, l’activité des canaux ioniques et l’expression génique dépendante du Ca2+. L’activité du récepteur intègre les signaux des catécholamines au sein des réseaux de signalisation autonomes et peut influencer la prolifération cellulaire ainsi que les programmes de remodelage dans les tissus répondeurs. Une signalisation adrénergique dérégulée impliquant ADRA1D a été étudiée dans la physiologie cardiovasculaire et urogénitale, ainsi que dans des contextes plus larges où la signalisation Ca2+ induite par les RCPG affecte l’inflammation et les transitions d’état cellulaire.
α1D-AR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADRA1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADRA1D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADRA1D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADRA1D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.