Plásmido CRISPR de Activación (h) α_1D-AR: sc-402904-ACT

ADRA1D codifica el receptor adrenérgico humano α1D (α1D-AR), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para activar la fosfolipasa C, aumentar el Ca2+ intracelular y estimular la señalización dependiente de PKC. Entre los efectos posteriores se incluyen la modulación de las vías MAPK/ERK y de programas transcripcionales que regulan la contractilidad del músculo liso, el tono vascular y la neurotransmisión autonómica. La actividad de α1D-AR influye en la fisiología cardiovascular y urogenital, y se estudia en el contexto de una señalización adrenérgica desregulada asociada con hipertensión, disfunción del tracto urinario inferior y otros trastornos que implican una respuesta alterada del músculo liso. La expresión de ADRA1D y la dinámica de su señalización también proporcionan una lectura mecanística del tráfico de GPCR, la desensibilización y el acoplamiento receptor-efector en células humanas.

α1D-AR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADRA1D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α1D-AR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADRA1D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADRA1D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α1D-AR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADRA1D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α1D-AR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α1D-AR en células tumorales con expresión de ADRA1D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.