Plasmide CRISPR/Cas9 KO α_1B-AR (m): sc-419020

Présentation

Adra1b code le récepteur adrénergique α1B murin (α1B-AR), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe préférentiellement à Gq/11 pour activer la signalisation via la phospholipase Cβ, augmentant la libération de Ca2+ médiée par l’IP3 et l’activation de la PKC dépendante du diacylglycérol. Par ces voies, l’α1B-AR régule le tonus du muscle lisse, la neurotransmission et l’excitabilité cellulaire, et peut aussi engager des programmes en aval MAPK/ERK qui influencent l’expression génique et les réponses adaptatives. Dans les contextes neural et cardiovasculaire, la signalisation des récepteurs adrénergiques s’entrecroise avec les circuits de réponse au stress et la régulation autonome, reliant Adra1b à des phénotypes pertinents pour l’hypertension, certains traits neuropsychiatriques et la dérégulation adrénergique dans des modèles de maladie. L’étude de la fonction de l’α1B-AR soutient les travaux mécanistiques sur le biais de signalisation des GPCR, le dialogue entre récepteurs et le contrôle transcriptionnel dépendant du calcium.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α1B-AR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adra1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adra1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adra1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α1B-AR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adra1b pour l'étude de la signalisation de α1B-AR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adra1b essentiels à la fonction de α1B-AR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adra1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α1B-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α1B-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adra1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α1B-AR plasmide HDR (m) et le α1B-AR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adra1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adra1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.