α_1A-AR Double Nickaseプラスミド (h): sc-401726-NIC

ADRA1Aは、ヒトのα1Aアドレナリン受容体（α1A-AR）をコードする遺伝子です。α1A-ARはGタンパク質共役型受容体（GPCR）で、主にGq/11と共役してホスホリパーゼC（PLC）シグナル伝達、イノシトール三リン酸（IP3）依存的なCa2+動員、ならびにプロテインキナーゼC（PKC）活性化を促進します。これらの経路を介して、α1A-ARは平滑筋収縮、血管緊張、神経伝達を調節し、MAPK/ERKシグナル伝達やより広範な転写応答にも下流効果を及ぼします。ADRA1Aの発現量とシグナルのバランスは、心血管系および泌尿生殖器系の生理機能に対するアドレナリン作動性制御に寄与しており、その破綻は交感神経シグナルの変化や組織リモデリングを伴う病態と関連します。細胞表面に存在し、明確なセカンドメッセンジャー出力をもつGPCRであることから、受容体脱感作、バイアスドシグナリング、他のGPCRや増殖因子経路とのクロストークの研究に一般的に用いられています。

α1A-AR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADRA1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADRA1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADRA1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADRA1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。